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    • 簡介:分類號TP271單位代碼10433密級學號14403030083山東理工大學山東理工大學碩士學位論文蘋果蘋果MDCER4MDCER4、MDWSD1MDWSD1、MDMAH1MDMAH1基因基因的克隆及對乙烯調控的響應的克隆及對乙烯調控的響應THECLONEOFMDCER4,MDWSD1,MDMAH1ANDTHEIRRESPONSETOETHYLENEREGULATION研究生王東陽王東陽指導教師李富軍教授李富軍教授申請學位門類級別工學碩士學科專業名稱食品科學與工程食品科學與工程研究方向果蔬采后生理與貯藏保鮮技術果蔬采后生理與貯藏保鮮技術論文完成日期20162016年4月1919日山東理工大學碩士學位論文摘要I摘要表皮蠟質的合成過程分為?;€原和脫羰基兩個途徑,其中CER4、WSD1基因參與了?;€原途徑,MAH1基因參與了脫羰基途徑。本文以紅星蘋果(MALUSDOMESTICABORKHCVSTARKRING)作為實驗材料,克隆了MDWSD1、MDMAH1和MDCER4基因,預測了其生物學功能;研究了其在蘋果發育期和貯藏期的表達模式,檢測了發育期和貯藏期蘋果蠟質成分和含量的變化;通過1甲基環丙烯(1METHYLCYCLOPROPENE,1MCP)和乙烯利(ETHREL,ETH)處理,研究了采前和采后乙烯調控對MDWSD1、MDMAH1、MDCER4基因表達的影響。主要結果如下1、克隆了MDWSD1、MDMAH1、MDCER4基因片段的序列,長度分別為578BP、500BP和509BP,然后通過與蘋果基因組數據庫比對,獲得三種目的基因的全長序列。生物學信息分析表明MDWSD1基因序列全長2622BP,其蛋白具有WESACYLTRANSF和ACYLWSDGAT兩個蛋白保守區,前者編碼蠟質合成酶?;鵆OA轉移酶,后者編碼?;D移酶;MDMAH1基因序列全長2148BP,其蛋白具有PLN03195、P450、CYPX和PTZ00404四個蛋白保守區,第一個保守區編碼脂肪酸Ω脫氫酶,其余的均與細胞色素P450區域有關;MDCER4基因序列全長1620BP,其蛋白具有FARN_SDR_E和PLN02996兩個保守區,編碼脂酰輔酶A還原酶。2、在蘋果發育期,果實表皮蠟質質量分布密度在采前60D~7D逐漸升高,在采前7D~0D則會快速下降,與發育期MDWSD1基因相對表達量的變化趨勢一致;采前7D~0D時酯類含量明顯下降,表明MDWSD1基因可能與表皮蠟質中酯類合成密切相關。在蘋果貯藏期,果實表皮蠟質質量分布密度整體呈逐漸上升的趨勢,其中酯類和醇類成分含量在貯藏0D~120D內增加相對明顯;MDWSD1、MDMAH1和MDCER4基因在貯藏30D~90D期間的相對表達量處于相對較高的水平,且與酯類、醇類含量的變化趨勢基本一致;該結果表明MDWSD1、MDMAH1和MDCER4三種基因可能通過調控酯類和醇類的合成影響了表皮蠟質含量。3、對采前ETH和1MCP處理的蘋果表皮蠟質合成基因表達的變化研究發現MDWSD1基因受乙烯正調控,乙烯對MDMAH1和MDCER4基因的調控無明顯規律。與CK相比,ETH促進了酯、醛、烷和醇類物質含量的增加,1MCP處理則抑制了這些蠟質成分的增加,這與三種處理下蘋果表皮蠟質質量分布密度的變化規律一致。4、對采后ETH和1MCP處理的蘋果表皮蠟質合成基因表達的變化研究發現MDWSD1和MDCER4基因受乙烯正調控,乙烯對MDMAH1基因的調控無明顯規律。與CK相比,ETH促進了貯藏期MDWSD1和MDCER4基因的表達,加快了紅星蘋果表皮蠟質含量的上升,而1MCP處理抑制了MDWSD1和MDCER4基因的表達,減緩了紅星蘋果表皮蠟質含量的上升。該結果表明乙烯通過對MDWSD1和MDCER4基因表達的正調控,提高了酯類和醇類物質的含量。關鍵詞蘋果;蠟質;合成;基因;乙烯
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      上傳時間:2022-07-27
      頁數: 74
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    • 簡介:紅色砂梨(PYRUSPYRIFOLIANAKAI)原產中國云南和四川南部,近年來,以原產云南著名紅色砂梨地方品種‘火把梨’為親本育成的優良品種已在全國各地引種栽培,得到了消費者的廣泛認可,市場前景廣闊。紅色砂梨的相關研究多集中于著色機理上,著色調控方面的研究相對較少,難以滿足生產上優質紅色砂梨生產的需求。此外,本課題組的前期研究發現紅色砂梨不同于西洋梨和蘋果的著色規律,因此有必要對紅色砂梨著色調控及其相關分子生理機制進行系統研究,為紅色砂梨生產中的著色調控技術的開發提供理論支持。本研究以紅色砂梨中熟品種‘滿天紅’和‘美人酥’,晚熟品種‘云紅梨1號’為主要試材,系統研究了溫度、光照、機械傷和化學藥劑等試驗處理對紅色砂梨著色調控的效應及相關分子生理機制,同時探討了采收成熟度對誘導紅色砂梨著色的影響及相關分子生理機制,主要研究成果如下1、UVB白光誘導條件下,高溫27℃誘導紅色砂梨品種‘云紅梨1號’果皮中花青苷積累的效應顯著優于低溫17℃,這可能緣于高溫較低溫果皮具有更高的PAL酶活性以及PYMYB10和結構基因PPPAL、PPCHS、PPANS和PPUFGT的表達水平。2、紅色砂梨對UVB白光誘導的響應與蘋果較為相似,而與西洋梨有顯著差異。不同紅色砂梨品種的最佳著色溫度和可誘導著色的溫度范圍均有所不同,紅色砂梨‘滿天紅’和‘美人酥’最佳著色溫度分別為17℃和12℃。光強和光質都對紅色砂梨著色具有重要影響,高光強有利于紅色砂梨著色,UVB和白光在紅色砂梨果皮花青苷積累方面具有顯著地互作增益效應?;诒狙芯康慕Y果,我們認為低溫和高強度的UVB白光環境有利于獲得較佳著色的‘滿天紅’和‘美人酥’,同時可較好的維持果實內在品質。3、機械傷處理能夠有效促進‘滿天紅’果實在UVB白光誘導條件下受傷部位花青苷的積累,并伴隨著該部位果實硬度顯著下降,乙烯釋放速率顯著上升,花色苷合成相關基因PPF3H、PPANS、PPUFGT和PYMYB10表達量的顯著上調,而對照果實僅發生了輕微著色,且未檢測到乙烯的釋放。推測乙烯可能參與了紅色砂梨果實花色苷合成的調控,對花色苷合成具有促進作用。機械傷處理可以作為一種有效的研究方法用于果實著色調控機制的研究。4、采收成熟度對誘導紅色砂梨著色效應具有重要影響,且這種影響會隨著果實臨近商業采收期而減弱。成熟度較高果實中更高的花青苷的積累,可能與其果實具有更高的可溶性糖含量以及花青苷相關結構和調節基因尤其是PPCHS,PPF3H,PPANS,PPUFGTPYMYB10和PPBHLH等的高量表達有關。商業成熟期前10D是紅色砂梨采后誘導著色的最佳采收期。5、在UVB白光的誘導條件下,不同藥劑處理對紅色砂梨‘滿天紅’著色及主要果實品質的調控效應不同。04MMOL。L1ABA和3MMOLL1GA對‘滿天紅’果皮花青苷合成沒有增效2MMOLL1ETH、012MMOLL1GNT和2MMOL。L1MJ處理以及它們混合使用均能促進‘滿天紅,果皮花青苷著合成,ETH和MJ間還存在顯著地互作增益現象,這些處理還能較好地維持果實硬度、可溶性固形物、可溶性糖和有機酸的含量等。6、MJ處理顯著提高了紅色砂梨‘滿天紅’果皮中PPCHS2、PPCHI3、PPF3H、PPANS、PPDFR1、PPUFGT1、PPUFGT2和PYMYB10的表達水平,從而促進其果皮中花青苷的積累。曝光處理后,PPBHLH和PPWD40表達在對照中不受誘導,而在MJ處理中出現上調表達現象,推測這兩個基因的上調表達也是MJ促進花青苷積累的原因之一。紅色砂梨花青苷合成過程中,花青苷合成結構基因不同成員的表達模式和相對表達量的變化存在顯著差異,這些成員的功能可能有所不同。
      下載積分: 4 賞金
      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 123
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    • 簡介:安徽農業大學博士學位論文摘要I摘要美國山核桃CARYAILLINOENSISKKOCH是胡桃科JULACEAE山核桃屬CARYANUTT落葉喬木,原產美國密西西比河和墨西哥北部。美國山核桃在新西蘭、美國、法國、西班牙、俄羅斯、澳大利亞、日本等國有栽培我國江蘇、上海、四川、浙江等南方地區也有一定規模的引種。美國山核桃是一種用途廣具有良好經濟效應和社會效應,受益時間久且生態效益明顯,具有廣闊應用前景的優良經濟樹種。本研究以美國山核桃為材料,對美國山核桃引種安徽的可行性和適應性進行了研究,篩選出適合在安徽省四個生態區域內生長的品種;分析了美國山核桃的光合作用及葉片胞間CO2濃度的日變化,為綜合利用和深入開發山核桃資源提供技術保障。為掌握美國山核桃花芽分化機理,采用石蠟切片技術,對其花芽分化過程進行解剖學觀察;測定了花芽分化過程中POD酶和SOD酶兩種關鍵酶活性,探討其變化與花芽分化的關系;同時通過REALTIMEPCR分析花芽分化過程中的重要基因CCLFY的表達情況,為研究美國山核桃成花機理和花芽分化機理奠定基礎。主要結果如下1、引種的23個美國山核桃品種在不同試驗地中品種保存率不同,合肥和含山試驗地中品種保存率較高,樅陽試驗地次之,潛山縣最低。在相對一致的栽培管理水平下,美國山核桃株高、徑生長量在不同試驗地中的差異不顯著,不同品種間生長量均值差異顯著(P005)。研究表明,通過比較安徽地區的四個地區的美國山核桃的年生長量,由高到低依次為含山、合肥、樅陽和潛山。在所有引種品種中,合肥試驗地的MAGENTACSV1714生長量最高;含山試驗地生長量較大的品種為ELLIOTT;樅陽試驗地生長量較大的品種為SDLINGCSV36和SDLINGCSV1510;潛山試驗地生長量較大的品種SDLINGCSV1314,SDLINGCSV105,FKERTCSV55。不同試驗地中美國山核桃果實性狀及結實產量不同,不同品種間亦存在差異。合肥試驗地較好,樅陽試驗地次之,含山試驗地最差。其中,合肥試驗地中果實性狀及結實量較好的品種為3,4號,即JAMES,MAGENTACSV1714;含山試驗地中果實性狀及結實量較好的品種為2號,即ELLIOTT;樅陽試驗地中果實性狀及結實量較好的品種為4,22號,即MAGENTACSV1714,MOE。結合品種出苗率、移植后存活率、生長量和果實性狀和結果率,我們認為MAGENTACSV1714適合合肥地區種植,ELLIOTT適合含山地區種植,MAGENTACSV1714種植和MOE適合樅陽地區種植,SDLINGCSV105適合潛山地區種植。2、美國山核桃品種MAGENTACSV1714在生長過程中光合速率全天的日變化除早、晚低溫情況下以及中午高溫“午休現象”下光合速率較低外,其他時間段均具有
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      上傳時間:2022-07-28
      頁數: 74
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    • 簡介:分類號河南農業大學碩士學位論文論文題目密級英文題目TRANSFORMATIONOFTUNISIASOFTSEEDPOMEGRANATETUMEFACIENS導專論文提交日期學位授予日期致謝本課題研究是在導師陳延惠教授的悉心指導下完成的,從論文的選題、設計,試驗材料的準備、研究方案的設計實施及論文的撰寫,都傾注了導師陳老師的大量心血。恩師淵博精湛的學識造詣和學術思想、淵博的理論知識與實踐經驗、嚴謹和求實創新的治學態度、誨人不倦的敬業精神以及對學生的鞭策鼓勵諄諄教誨,令我受益匪淺;同時,陳老師對科研事業的獻身精神和實事求是的一貫作風,都將成為我學習的榜樣。在此畢業論文完成之際,謹向導師致以最衷心的感謝和最崇高的敬意在論文的選題過程中,吳國良教授、宋尚偉副教授、胡青霞副教授、鄭先波副教授、胡喜來副教授、葉霞副教授等都提出了寶貴的意見,尤其在論文的開題和試驗研究的過程中,對試驗過程中出現的問題和難題,馮建燦教授和譚彬副教授給予了寶貴的建議和精心的指導,再次謹向敬愛的老師們致以最真誠的的感謝在研究生的三年學習生活中,得到了園藝學院各位領導和老師的關心和幫助,在此我也表示衷心的感謝同時,三年的研究生課題研究過程中,師妹吳亞君也幫忙協助做了大量的工作,試驗過程中也得到了張芳明、劉嶧、連曉東等同學的鼎力幫助,在此表示衷心的感謝還要感謝父母在我求學生涯中給予我無微不至的關懷和照顧,一如既往地支持我、鼓勵我感謝所有關心、支持和幫助我的老師、同學和親友,感謝他們在我求學的過程中給予的極大地精神鼓勵和無微不至的關懷,幫助我順利完成學業郭曉麗2013年5月于鄭州
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      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 46
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    • 簡介:神農香菊DENDRANTHEMAINDICUMVARAROMATICUM為菊科菊屬植物,是一種新的野生資源,其花、葉及根均具有濃郁的香氣,民間常以其花、葉陰干作香囊。其花、葉有清熱解毒的功效,是一種值得研究、開發、利用的藥用植物新資源。本論文主要探討了野生植物神農香菊組織培養及細胞懸浮體系的建立,為神農香菊的原生質體分離、純化以及原生質體融合提供一定的理論基礎。主要研究結果如下1、采用不同植物生長調節劑6BA和NAA組合對神農香菊叢生芽誘導的實驗表明神農香菊的嫩莖比較容易誘導出叢生芽,以莖段為外植體,在含有6BA01MGL和NAA01MGL的培養基上不定芽誘導率可達90%,且腋芽長勢良好,平均每個外植體可以產生87個不定芽;培養基為MS6BA03MGLNAA01MGL時,較適宜神農香菊叢生芽的繼代培養;在6BA和NAA的不同組合處理時,神農香菊均能生根,但是在MSNAA03MGL培養基中根最長,達58CM,數量最多且根最粗壯,在其它配方中,根較細長柔弱,生根率較低。2、以花器官不同組織部位為外植體,通過愈傷組織途徑建立無菌培養體系,結果表明誘導花瓣愈傷組織的最佳培養基為MSNAA02MGL6BAL5MGL誘導花托愈傷組織的最佳培養基為MS6BA20MGLNAA02MGL。采用不同發育時期的神農香菊花托作為外植體進行組織培養,成功誘導了愈傷組織,花托處于顯蕾初期,誘導分化效果較好;處于同一時期的花托,誘導分化率隨著直徑的增大而降低,直徑越小,形成愈傷組織速度越快,誘導分化效果越好;誘導花梗愈傷組織的最佳培養基為MSNAA01MGL6BAL0MGL2,4D20MGL花藥在MS6BA20MGL2,4D10MGL,蔗糖濃度為6的培養基上誘導出愈傷組織,然后轉接到MS6BA05MGLNAA02MGL培養基上產生的不定芽數量最多。各種花器官外植體誘導愈傷組織由易到難依次為花托花藥花?;ò?。NAA可以增強其生根的效果,濃度以03MGL為宜,移栽成活率達80以上。3、神農香菊不同外植體對愈傷組織誘導有很大的影響,其中無論是愈傷誘導率、愈傷長勢還是愈傷硬度,莖段的為最佳的外植體,誘導率雖然不是最高,但是其硬度最低,且長勢都好于其他外植體。在添加BA02MGL和2,4D10MGL的培養基上誘導率達到100。培養基為MSNAA01MGL6BA05MGL時,愈傷誘導成芽率最高,達867。4、愈傷組織接種在液體培養基MSBA02MGL2,4D05MGL上,愈傷組織的生長量最大,2G愈傷接種18D后鮮重達到812G。細胞懸浮培養過程中,懸浮培養物的鮮重、PH和蔗糖濃度都發生了一定的變化,其生長曲線呈“S”型增長,存在生長延滯期、對數生長期、停滯期;PH值的變化呈現一直下降趨勢,但是可以一直保持在40以上,可以維持細胞生長酸度;蔗糖濃度也呈現下降趨勢,主要是因為在細胞生長過程中要消耗大量的糖所致。
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      上傳時間:2022-07-26
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    • 簡介:西南大學二零一三屆碩士學位論文超量表達BOFLCATFT對芥菜開花期及抗寒性的影響學科專業蔬菜學研究方向蔬菜遺傳育種與生物技術指導老師宋洪元研究員論文作者楊海鵬中國重慶2013年05月目錄目錄摘要IABSTRACTIV第1章文獻綜述111植物開花途徑1111自主途徑AUTONOMOUSPATHWAY1112光周期途徑PHOTOPERIODPATHWAY2113赤霉素途徑加BERELLINPATHWAY2114春化途徑VERNALIZATIONPATHWAY312低溫脅迫與信號轉導4121低溫脅迫下植物的反應4122低溫脅迫與信號轉導413植物開花與抗寒之間關系。614FLC、刀結構功能及在轉基因植物中的應用7141FLC、刀結構功能7142FLC、刀在轉基因植物中的應用7143其他開花在轉基因植物中的應用9第2章引言。1121研究目的意義1122研究技術路線12第3章材料和方法1331實驗材料、藥品及儀器13311植物材料與表達載體13312試劑及藥品13
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      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 64
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    • 簡介:溝葉結縷草愈傷組織再生體系的優化論文作者簽名指導教師簽名論文評閱人塍云文教授浙江太堂國藝丕盆昌態教援逝江太堂國藝丕樓建垡高工杭州植物園答辯委員會主席摟曉明教授級高工杭劃直園文局..答辯委員會委員夏宜堊教授逝延太堂國撻砑究壓固撾至副教授逝江太堂國撻班究壓柴明良副教授、逝江太堂園撻班究壓致謝能夠完成學業和論文,我首先應該感謝導師柴明良副教授。他不僅是一位治學嚴謹、學識淵博的學者,更是一位和藹可親的長者,也是一位真摯的朋友。近三年的研究生生涯,有幸得到柴老師的敦敦教導、熱心幫助,是我求學生涯中最幸運的事。柴老師除了培養我的科研思維、科研能力,在學習和實驗上對我細心教導,在生活上更是對我關懷備至。論文的選題、方案的設計、試驗的操作、論文的撰寫等多個環節,都凝聚著柴老師的心血。試驗過程中,當試驗不順利時,柴老師給予了我建議和莫大的鼓勵,使我重振旗鼓,繼續奮斗。值此論文完成之際,衷心地表達我對柴老師的感激之情感謝園林所夏宜平和周樹軍老師在研究生課程上的教導。特別感謝我的師兄陳曙、李克虎,師姐賈玉芳、王麗萍、林文丹,同學張麗,師妹邵麗達,他們在我的生活和試驗上給予了我莫大的幫助和支持,沒有他們,我的生活將略顯枯燥,沒有他們,我的試驗和論文也無法順利完成同時要感謝我的室友譚欣、肖郁綿、廖金及園林所的其他同學,謝謝他們在我的生活上給予的無私幫助還要感謝我的家人和遠方的好友多年來對我的支持和鼓勵,他們給予我堅持完成學業和科研的動力最后,謹向參加本論文評閱、答卷的各位老師致以最誠摯的謝意顧敏霞2013年1月10號于杭州浙江大學紫金港校區
      下載積分: 4 賞金
      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 53
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    • 簡介:2014MASTERTHESISOFSOUTHWESTUNIVERSITYECTOPICEXPRESSIONANALYSISANDCITRUSTRANSTORMATIONOILLMONOLNN●NT●■1UDPGLUCOSYLTRANSFERASEGENECITLGTDISCIPLINECELLBIOLOGYDIRECTIONCROPGENETICSANDBREEDINGSUPERVISORPROFCHENSHANCHUNASSOIATEPROFZOUXIUPINGCANDIDATEMAYUANYUANCHONGQINGPRCHINAMAY2014目錄摘要IABSTRACTIII第一章文獻綜述111柑橘產業現狀L12橙汁加工業現狀213我國橙汁加工業面臨的難題。2131橙汁加工用果實的品質要求一3132橙汁加工中的“延遲苦味”現象314橙汁脫苦技術研究進展5141物理化學脫苦工藝5I42基因工程脫苦~515檸檬苦素類似物糖基轉移酶基因CF圮GR的研究進展616外源基因在植物體內的表達調控7I61提高外源基因在植物體內表達的策略7I62降低或抑制基因表達的方式8第二章引言II2I研究的目的與意義I122主要技術路線圖13第三章材料和方法1531材料、儀器與試劑15311載體、菌株、材料153I2主要儀器153I3試劑153I4溶液163I5培養基1832實驗方法19321目的基因的獲得19322超量表達載體P35SCITLGT的構建22323RNA干擾表達載體的構建2L324只含有INTRON的P35SINTRON載體的構建22
      下載積分: 4 賞金
      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 66
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    • 簡介:東北林業大學博士學位論文黑木耳分級多糖抗氧化活性及其相關生理功能研究姓名趙鑫申請學位級別博士專業森林植物資源學指導教師王振宇201106東北林業大學博士學位論文糖的抗輻射和抗疲勞功能主要是通過發揮其抗氧化作用來實現的。本文的研究結果為黑木耳多糖在醫藥、功能保健品、化妝品等領域的應用奠定了基礎。關鍵詞黑木耳分級多糖;抗氧化;生理功能
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      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 118
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    • 簡介:UNIVERSITYCODE10635STUDENTNUMBER112010326002223DISSERTATIONFORMASTER’SDEGREEOFSOUTHWESTUNIVERSITYGENETICANALYZINGOFTHEMUTANTMATERIALWITHSTIGMAEXPOSEDINBRASSICANAPUSLCANDIDATEXIEQINGSUPERVISORPROFESSORJIANALIMAJORCROPGENETICSANDBREEDINGDIRECTIONTHEORYANDMETHODOFCROPBREEDINGCHONGQINGCHINAMAY2013目錄目錄摘要ABSTI’ACT第一章文獻綜述111引言L12突變體的獲取方式2121自然發生2122物理誘變方式2123化學誘變3124插入誘變313植物花發育研究現狀概述4131植物花器官發育控制模式4132植物MADSBOX基因研究進展8133花器官發育模型研究的前景814油菜花發育的研究進展9141花的形態構建9142擬南芥成花轉變的分子模式9143花器官形態發生1015基因定位和克隆的方法11151圖位克隆的方法12152擬南芥基因的圖位克隆12153圖位克隆技術中所用的分子標記13154BSA法在圖位克隆中的運用。1516擬南芥的SAM相關基因的表達調控1617開題設想17第二章材料和方法21材料L922方法19221田間觀察19222顯微結構觀察19223切片觀察19224花粉涂片觀察20225突變性狀的育性觀察。20226田間雜交和F2遺傳群體構建21227油菜基因組總DNA的提取21228微衛星標記SSR篩選21229遺傳作圖。22
      下載積分: 4 賞金
      上傳時間:2022-07-26
      頁數: 57
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    • 簡介:UNIVERSITYCODE10225REGISTERCODES11163DISSERTATIONFORTHEDEGREEOFMASTEREDNALIBRARYCONSTRUCTIONANDEXPRESSEDSEQUENCETAGSESTANALYSISOFTHERIPENINGVITISAMURENSISSHUANGHONGBERR3SKINSURENSLSCVHONABERRYKANSCANDIDATESUPERVISORASSOCIATESUPERVISORACADEMICDEGREEAPPLIEDFORSPECIALITY’DATEOFORALEXAMINATIONUNIVERSITYLIFENGPROFWANGJUNYANGCHENGJUNMASTERFORESTPLANTRESOURCESCIENCENORTHEASTFORESTRYUNIVERSITY摘要摘要山葡萄是東北地區釀造葡萄酒的主要原料,用山葡萄釀造的葡萄酒口味獨特,深受國內外消費者的歡迎。為了研究山葡萄成熟過程中相關基因的表達情況,鑒定出與山葡萄成熟、香氣物質形成、花色苷合成及抗病相關的基因,進行了以下研究通過三種RNA提取方法提取山葡萄成熟果皮的總RNA,其中改良的CTAB法能分離出高質量的RNA,可以用于下一步的分子生物學研究。以山葡萄成熟果皮為材料,采用CREATORSMARTTMCDNALIBRARYCONSTRUCTION技術構建了CDNA文庫。經鑒定,文庫的庫容量為1001X106,重組率為94%,插入片段在02520KB之間。經隨機測序,獲得935條有效EST,聚類拼接后得到636條單基因簇UNIGENES,包括108個重疊群CONTIGS和528個單拷貝SINGLETS。這些數據為今后山葡萄功能基因的分離克隆和功能基因組學的研究奠定了基礎。EST分析結果表明,文庫中未知功能基因FUNCTIONUNKNOWN占1792%,控制代謝METABOLISM的基因為2081%,與細胞救援與防御CELLRESCUE,DEFENCE相關的基因為515%,信號轉導SIGNALTRANSDUCTION基因為468%,能量ENERGY相關基因為561%,蛋白合成PROTEINSYNTHESIS相關基因為959%,蛋白活性調節PROTEINACTIVITYREGULATION基因為1543%,細胞結構CELLSTRUCTURE基因為912%,控制運輸TRANSPORT基因為655%,轉錄TRANSCRIPTION基因為515%。在文庫中,核糖體蛋白的數量最多,為28個,占全部EST序列的538%,有比較多的核糖體蛋白說明在山葡萄果皮生命活動過程中,蛋白質合成活動旺盛。文庫中與花色苷合成相關的基因包括查爾酮合酶CHALCONESYN_TLLASE,CHS、類黃酮3’,5’羥化酶FLAVONOIDFLAVONOID3’,5HYDROXYLASE,F3芍H、苯丙氨酸解氨酶PHENYLALANINEAMMONIALYASE,PAL、谷胱甘肽S轉移酶GLUTATHIONESTRANSFERASES,GST等,這些基因都與已知基因或者基因家族有高度相似性E。L∞80%。文庫中與香氣物質形成相關的基因主要有脂肪氧化酶LIPOXYGENASE、苯丙氨酸解氨酶PHENYLALANINEAMMONIA1YASE、醇脫氫酶ALCOHOLDEHYDROGENASE等8個酶基因,與成熟相關的基因有多聚半乳糖酶POLYGALACTURONASE、成熟相關蛋白鰣P22RIPENINGRELATEDPROTEINGRIP22、果膠酶PECTINESTERASE、脂肪氧化酶LIPOXYGENASE。根據已有的文獻資料,從山葡萄成熟果皮的CDNA文庫中挑選了23個和山葡萄抗病相關的基因,為以后更好的研究山葡萄的抗病機制提供了基礎。關鍵詞山葡萄;EDNA文庫;表達序列標簽
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    • 簡介:獨創性聲明本人提交的學位論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中引用他人已經發表或出版過的研究成果,文中己加了特別標注。對本研究及學位論文撰寫曾做出貢獻的老師、朋友、同仁在文中作了明確說明并表示衷一D感謝。,、學位論文作者彳眵子簽字日期Ⅻ侈年G月鄉日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解西南大學有關保留、使用學位論文的規定,有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權西南大學研究生院籌可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。,保密的學位論文在解密后適用本授權書,本論文日,不保密,口保密期限至年月止。學位論文作者簽名研碭去簽字日期Ⅻ彥年6月多日鋤鼢研銣簽字日期沙汐/鄉年多月鄉日34結果與分析21341PMADS20的克隆的全長序列獲得2L342矮牽牛PMADS20基因EDNA的序列特征22343P刪D船D基因進化樹分析2235討論23第4章矮牽牛PMADS20基因的表達分析2541實驗材料與試劑25411實驗材料25412試劑盒及主要設備2542實驗方法25421總RNA的提取25422EDNA第一鏈合成25423PMADS20基因表達特性分析2543結果與分析26431總RNA提取26432PMADS20基因表達特性分析27433PMADS20表達的實時熒光定量分析3044討論31第5章植物超表達載體、融合沉默載體構建與轉化矮牽牛研究3351實驗材料與試劑33511植物材料33512菌株載體33513主要儀器設備33514試劑盒及主要試劑33515常用試劑配制34516常用培養基配方3452實驗方法34521植物材料的培養。34522構建P蚴D舵D中間克隆載體35523構建PMADS20植物表達載體36523農桿菌感受態制備、轉化37524電擊杯的處理及農桿菌電轉化感受態細胞的轉化37525農桿菌介導的遺傳轉化38526轉基因矮牽牛的檢測。39
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    • 簡介:早熟是油菜育種改良的目標性狀之一。近年來,隨著現代生物技術的飛速發展與成熟,農桿菌介導的轉基因技術廣泛地運用在油菜上,但轉化效率受到眾多因素的影響,因此建立和完善一套穩定高效的再生和遺傳轉化體系非常重要。本文以甘藍型油菜品種‘浙雙758’等為研究材料,探討了油菜再生和遺傳轉化體系中的相關問題,并對轉基因苗進行了初步的PCR鑒定,取得的主要研究結果如下1以子葉柄為外植體油菜再生體系的改進與完善。在本試驗室研究基礎上,進一步研究了切下子葉柄外植體時油菜的苗齡,常用外源激素的濃度及配比組合對子葉柄外植體再生頻率的影響。試驗結果表明,甘藍型油菜不同品種的芽再生率和苗齡的關系走勢大致相同,均隨著時間的增加,苗齡越老,芽分化頻率也隨著快速下降,但下降的趨勢和時間不完全相同?!愦?19’最佳苗齡為播種后的第6天,此時再生率最高為65%,‘浙雙758’和‘浙雙72’最佳苗齡均為播種后第5天,芽的再生率分別為68%和65%。研究中還發現苗齡為10天時,三個品種的子葉外植體都基本不能再分化出再生芽,故用于再生的外植體不宜太老,應掌握好最佳的時間。在誘導愈傷的培養基上,2,4D在低濃度范圍下,誘導愈傷組織的能力隨著2,4D濃度的增加而增加,誘導的愈傷組織膨大呈綠色,致密當2,4D濃度超過一定范圍后,愈傷組織的誘導率反而下降,并且誘導出的愈傷組織有的呈白色,在后續的再分化中不能正常分化出健康的再生芽而本試驗中采用低濃度的2,4D和6BA組合的預培養基,愈傷組織的分化情況好,分化的愈傷正常,愈傷的誘導率比2MGL2,4D的預培養基要高,根據實驗結果,最佳預培養基為MS1MGL2,4D1MGL6BA。在再生植株生根上,添加一定濃度的NAA對再生植株根的再生有顯著的促進作用。當NAA超過一定濃度后,促進作用下降,但未達到抑制水平,試驗結果顯示最佳的生根培養基為12MS01MGLNAA。KAN對再生植株的生根有一定的影響,會影響正常的生根,試驗中應選擇低濃度、且影響相對較小的KAN來篩選轉化的植株。2、農桿菌介導的甘藍型油菜子葉柄外植體遺傳轉化體系的建立。試驗結果表明同一種抗生素同一濃度對帶有目的基因的農桿菌LBA4404和EHA105的抑制效果不同,并且抑制效果隨著抗生素濃度的升高而增大不同的抗生素對帶有目的基因的農桿菌的抑制效果也不同。用農桿菌EHA105轉導目的基因到油菜,發現用抗生素抑菌較困難,易發生農桿菌污染,而LBA4404則可用抗生素很好地抑制住。轉化體系中選用農桿菌LBA4404介導,抗生素用500MGL的特美汀。對于農桿菌侵染的時間和濃度的研究表明,油菜子葉柄外植體的褐化程度和污染率隨著農桿菌侵染的菌液濃度和時間的增大而升高,高濃度或者長時間的菌液侵染子葉柄外植體,可能造成外植體全部褐化,并且在分化培養階段500MGL的特美汀控制不住農桿菌的生長,導致外植體全部污染褐化死亡。選擇農桿菌LBA4404菌液濃度為OD60002時,褐化程度輕,抗性芽率也較高,農桿菌也容易控制,不會發生爆長的情況,在農桿菌LBA4404的OD600值為02時試驗中選擇60S的侵染時間較好。在KAN的敏感性試驗中,發現KAN對油菜子葉柄的再生有抑制作用,愈傷組織的誘導率隨著KAN濃度的增大先下降后又上升,說明高濃度的KAN能促進子葉柄外植體愈傷組織的形成,但此時的愈傷是不正常的愈傷,愈傷組織色白堅硬,愈傷膨大到一定程度后生長勢變弱,之后基本不能再進行正常綠色芽的分化,只能分化出一些白化、半白化和紫色的再生苗。綜合各種因素,試驗中宜選擇含有15MGLKAN的培養基進行轉化和篩選。3、獲得了農桿菌介導經過PCR初步鑒定為陽性的轉基因植株?!汶p758’子葉柄外植體愈傷組織經農桿菌侵染后進行抗性篩選及PCR驗證獲得的轉基因植株。
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    • 簡介:獨創性聲明學位論文題目監擅過氫絲塹鱉籃生盛蛋魚基圈Q旦型2鮑直隆丞絲自L塑生僉塹本人提交的學位論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中引用他人已經發表或出版過的研究成果,文中已加了特別標注。對本研究及學位論文撰寫曾做出貢獻的老師、朋友、同仁在文中作了明確說明并表示衷心感謝。學位論文作者越每CIFL/簽字日期勱,3年歲月羅J日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解西南大學有關保留、使用學位論文的規定,有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權西南大學研究生院籌可以將學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書,本論文曬不保密,口保密期限至年月止。學位論文作者簽名趙每轡Y導師簽名害贏幻含利3。弦簽字日期訓哆年歲月≥F日簽字日期ⅫF年6月/,日目錄摘要IABSTRACT。III第1章文獻綜述111植物過氧化物酶體概況112過氧化物酶體的功能113過氧化物酶體參與的反應~214過氧化物酶體的生物發生2141過氧化物酶體的分裂與增殖214,2過氧化物酶體蛋白的合成與運輸315PEX22基因的功能616H202的非生物脅迫6161H202的降解6162非酶促降解途徑7163酶促降解途徑717ABA的作用7第2章引言92。1研究背景和意義922技術路線10第3章蠟梅CPPEX22基因的克隆和序列特征分析1131實驗材料與試劑11311蠟梅花及蠟梅花EDNA文庫LL312菌株與載體11313主要儀器設備11314主要化學試劑1131。5常用自配試劑11316基本培養基1232實驗方法123。21EST序列特征分析12322CPPEX22基因EDNA的獲得13323CPPEX22基因的生物信息學分析1633結果與分析17331CTAB法提取蠟梅的基因組DNA17
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    • 簡介:結球甘藍(BRASSICAOLERACEALINNVARCAPITATADC),簡稱甘藍,屬于十字花科(CRUCIFERAE)蕓薹屬(BRASSICA)的兩年生草本植物,世界各地均有栽培,是一種重要的葉用蔬菜類作物。植物生長發育過程中存在著保守的表觀遺傳調控機制,其中最重要的一種組蛋白修飾就是賴氨酸組蛋白甲基化,主要由一類含有SET結構域的基因家族修飾,在真核生物中廣泛存在。植物SET結構域基因功能復雜,它們參與蛋白甲基化,影響染色體的濃縮和分離以調控染色體結構,還參與基因的轉錄調節、調控基因表達等眾多的細胞反應過程,對植物的生長發育起著重要的作用。本研究通過生物信息學分析方式,對SET結構域基因家族的基本信息(長度、分子量、等電點等)及染色體定位、結構域分布、基因結構、基因的系統進化等進行分析。同時,對SET結構域基因在結球甘藍“BO0112B”不同發育時期、不同器官中的時空表達圖譜進行分析。結果表明1結球甘藍基因組中共有29條SET結構域基因,這些基因不均勻的分布在甘藍9條染色體上,尤其1號染色體上沒有SET結構域基因。29條SET結構域基因開放閱讀框及編碼的蛋白長度各異,最長的BOL027564基因開放閱讀框長5088BP,編碼1695氨基酸殘基,而最短BOL044707基因開放閱讀框為405BP,編碼134氨基酸殘基。從基因結構來看,內含子最少有0個,最多超過20個。其中16條SET結構域蛋白呈堿性。2結球甘藍中SET結構域基因的系統進化分析,結合其他保守結構域的分布,甘藍中29條SET結構域基因家族可分為7個分支。第I分支保守結構域模型為SANTSET,第II分支保守結構域模型為AWSSETPOSTSET,第III分支保守結構域模型為PWWPPHDPHDSETPOSTSET,第IV分支保守結構域模型為PHDSET,第V分支保守結構域模型為SRAPRESETSET,第VI分支的結構域模型為SETPOSTSET,第VII分支只含有SET一個結構域。37條SET結構域基因(BOL040761BOL030053BOL042363BOL043727BOL025176BOL027607BOL011910)在結球甘藍的熒光定量表達分析表明,SET結構域基因在根、莖、花蕾、花中均有表達,在葉中不表達。其中在花蕾中表達量最高,根中次之。在不同發育時期花蕾的半定量表達分析中,SET結構域基因普遍在花粉母細胞時期高度表達。
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